背景介紹

重組生物技術制備的單克隆抗體（以下簡稱重組單抗）是生物制品中一類重要的藥物類別。近年來，由于其精確的靶向殺傷和中和等生物學效應，重組單抗在腫瘤、自身免疫性疾病等方面受到了廣泛的研究和應用，并且在神經學、眼科學等其他疾病領域的研究也開始逐步發展起來。目前，國內生產的重組單抗主要采用真核細胞培養表達的方法，在工藝研發和質量研究方面，藥品企業對主要有效成分的結構研究和質量控制關注較多，但是對產品組成中的雜質和相關物質研究較少或關注度不夠。考慮到這些雜質或相關物質是重組單抗產品中的重要組成部分，將會影響到產品的質量、臨床應用的安全性和有效性。

本方法主要采用CAPEL-205高效毛細管電泳儀測定重組治療性單克隆抗體（免疫球蛋白G，IgG）中產物的相關雜質，參照的是美國藥典第129章(Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies, Capillary SDS electrophoresis) 中的方法，也可以參照中國藥典2015版三部三部通則3127（ 單抗分子大小變異體測定法）中的方法。

1測試條件

USP129.還原條件

BGE：按照USP 129 中的凝膠條件

毛細管電泳:      Ltot = 30 cm, ID= 50 µm

樣品進樣:         -5 kV x 20 sec

電壓:               -15 kV

室溫:               25 ОС

檢測波長:         220 nm

  樣品: 重組IgG制劑

  IS  – 內標

  LC – 輕鏈

  NG – 非糖基化重鏈

  HC – 重鏈

USP129.非還原條件

BGE：按照USP 129 中的凝膠條件

毛細管電泳:      Ltot = 30 cm, ID= 50 µm

樣品進樣:         -5 kV x 20 sec

電壓:               -15 kV

室溫:               25 ОС

檢測波長:         220 nm

  樣品：重組IgG制劑

  IS  - 內標

  F1-F8  -  IgG相關雜質（片段）

  IgG  - 完整抗體

2測試結果

圖1 還原條件下的檢測色譜圖

圖2 非還原條件下的 檢測色譜圖

3結論

采用CAPEL-205高效毛細管電泳儀測定重組治療性單克隆抗體（免疫球蛋白G，IgG）中產物的相關雜質，可以實現的IgG產物中的相關雜質的有效分離，方法準確、靈敏度高、重現性好，可以滿足日常分析要求。

4配置列表

Capel-205毛細管電泳儀的優勢特點

• 通過施加高壓電場，基于毛細管液體樣本組成成分遷移速度的差別。應用UV吸收檢測技術，在毛細管出口應用高精度光學系統定量檢測分離出的組分 

• 光源：高強度氘燈，優化光學設計保證低檢出限 

• 可實現多種不同分析方法和分離模式，毛細管區帶電泳，毛細管膠束電動色譜，毛細管等電聚集，毛細管凝膠電泳，毛細管等速電泳 

• 全自動進樣，進樣方式可選電動及壓力進樣。壓力進樣，步進值1mbar，*高99mbar；電動進樣，電壓范圍：步進值1kV，1-25kV可調

• 毛細管冷卻：恒溫水冷系統，環境溫度5-50℃可調；恒溫水冷保證溫度控制更加精細和準確，提高分析效果（相對與風冷，冷卻效果更優/與液冷相比，成本更低） 

• 標準離心管1.5mL(Eppendorf型)適用于所有樣本分析 

• 擴展的全自動進樣器，高達59個進樣位，允許提供自動過夜分析功能 

• *全自動開口進樣設計，避免揮發和交叉污染 

• 新型高壓模塊提供±30kV壓力，保證超優的分析效率和快速分析時間 

• 采用流動電位控制技術，極大提高重現性，尤其是分析復雜樣品更具優勢

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