實時熒光定量PCR是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應(PCR)循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。

　　熒光PCR方法檢測病原體已成為常規檢測技術，在工作過程中我們也遇到了各種各樣、千奇百怪的問題，那么在PCR儀出現故障的時候應該怎么解決呢？

　　01反應后反應管壁出現液滴?

　　原因1：運行程序前沒有開啟熱蓋加熱功能

　　解決方法：開啟熱蓋加熱功能

　　原因2：反應結束后低溫保存時間過久

　　解決方法：運行結束后，熱蓋將自動關閉，所以冷凝會自然出現，這不會對實驗結果產生影響，將反應管置于離心機上瞬時離心機使液滴回到管子底部即可。

　　02反應管氣泡在 PCR 反應時，加熱破裂

　　反應時在實驗過程中出現了氣泡，導致中途產生了較大的波動，其特點是單個樣本的幾個通道的熒光曲線同時在某個循環出現趨勢一致的波動。

　　分析原因：氣泡在 PCR 反應的過程中被加熱，在某個時刻破裂，此時出現熒光擾動，在這個循環檢測到的熒光型號和上一個循環不一樣，此時如果波動位于基線期很可能就被軟件識別為開始擴增的拐點，擴增曲線就會產生結果。

　　03使用微孔板，

　　反應后反應液有明顯蒸發？

　　方法1：確保使用高質量的微孔板，反應前要嚴格密封；

　　方法2：確保蓋熱蓋，適當提高熱蓋的溫度；

　　方法3：增大反應體積。

　　04使用PCR管，

　　反應后PCR的管內反應液有明顯蒸發？

　　方法1：確保使用高質量的PCR管；

　　方法2：在樣品臺的四角放置四個同樣的空PCR管，以保證熱蓋壓在哥PCR管上的壓力均勻。

　　05PCR實驗結束后，

　　樣品可以一直放在PCR儀中低溫保存嘛？

　　當程序運行結束后，及時取出樣品并停止儀器運行，而不要把儀器當“冰箱”使用，低溫保存時溫度盡量設定得比較高，如8℃，這可以延長儀器的使用壽命。